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探測應答調控蛋白PhoBN^F20D自由態(tài)中存在的Pre-Active構象
寇新慧; 劉乙祥; 劉興弘; 李從剛; 劉買利; 姜凌 中國科學院生物磁共振重點實驗室; 波譜與原子分子物理國家重點實驗室; 武漢磁共振中心(中國科學院武漢物理與數(shù)學研究所); 湖北武漢430071; 中國科學院大學; 北京100049
關鍵詞：活性構象 應答調控蛋白
摘要：PhoB是PhoR/PhoB雙組分信號轉導系統(tǒng)(TCS)中的應答調控蛋白,來自大腸桿菌,可以參與環(huán)境中自由Pi的調控應答.PhoB擁有保守的磷酸化位點D53,當Mg^2+存在時,會變成活性構象,但是其中的機理尚不清楚.目前已經(jīng)有報道指出,自由態(tài)的應答調控蛋白存在少量的活性構象,而且它們和蛋白的激活過程相關,但是這種活性構象一般不穩(wěn)定,很難觀測到.本文以PhoBN^F20D作為模型,1H-15NHSQC和19F NMR譜圖顯示,自由態(tài)PhoBN^F20D在溶液中存在pre-active構象,BeF3^-可以穩(wěn)定這種活性構象,而且Mg^2+可以促進非活性構象到活性構象之間的轉化,在BeF3^-存在的情況下可以使PhoBN^F20D形成完全的活性構象.同時我們利用Carr-Purcell-Meiboom-Gill(CPMG)弛豫彌散實驗證明了PhoBN^F20D存在兩態(tài)交換.
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