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甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立
關鍵詞：甲型流感 hybeacon探針 熔解曲線 paradna 基因分型
摘要：目的建立一種無需核酸提取,直接檢測鼻咽拭子中甲型流感病毒H1HA pdm09、H3HA亞型和季節(jié)性流感病毒H1HA non-pdm09的POCT快速分型方法。方法針對3種流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列保守區(qū)設計高度特異性的引物和HyBeacon探針,同時以人類RNaseP基因作為內(nèi)參。優(yōu)化多重PCR反應條件,建立用熔解曲線分析甲型流感病毒基因分型的方法,并將其應用到ParaDNA核酸POCT檢測儀,對50例甲型流感病毒抗原初篩陽性且經(jīng)過實時熒光定量PCR檢測的臨床鼻咽拭子標本進行檢測。結(jié)果該方法可在1.5 h內(nèi)完成對3種甲型流感病毒亞型HA基因的特異性擴增和分型,與其他7種呼吸道病原微生物無交叉反應,其核酸檢測下限為50 copies/μl。對臨床50例甲型流感病毒抗原陽性的鼻咽拭子標本進行直接檢測,檢出H1HA pdm09陽性標本48例,H3HA陽性標本2例,未檢出季節(jié)性流感H1HA nonpdm09陽性標本。結(jié)論基于HyBeacon探針和ParaDNA核酸POCT檢測儀所建立的甲型流感病毒快速分型方法能同時檢測H1HA pdm09、H3HA和季節(jié)性流感病毒H1HA non-pdm09。該方法無需核酸提取,操作簡便,檢測時間短,適于對甲型流感病毒抗原初篩陽性的鼻咽拭子開展現(xiàn)場基因分型檢測,可為流感的診治和防控提供及時快速的實驗室依據(jù)。
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