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煙草CSN4基因的原核表達及純化
龔露; 鐘杰; 高潔; 佟碩秋; 吳擁軍 貴州大學生命科學學院; 貴州貴陽550025
關鍵詞：cop9信號復合體 基因克隆 原核表達 親和純化
摘要：以野生型煙草（Nicotiana tabacum）為試驗材料,采用RT-PCR克隆獲得CSN復合體亞基CSN4c DNA序列,基因登錄號為KC866360。序列分析表明,CSN4基因ORF長為1194 bp,編碼398個氨基酸,蛋白分子質量為43.78 k Da。將CSN4構建至原核表達載體,獲得重組子pET28a-CSN4/BL21（DE3）,通過Ni-IDA親和層析純化目的蛋白,SDS-PAGE和Western Blotting檢測,結果顯示：0.25 mM IPTG,15℃誘導16 h獲得濃度為0.476 mg/m L、純度高達95%的CSN蛋白,為后續(xù)CSN4基因功能研究奠定了基礎。
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