cdh 5-mRNA在野生型斑馬魚胚胎發(fā)育過程中的表達
關(guān)鍵詞：斑馬魚 胚胎發(fā)育 cdh 5基因 基因表達
摘要：目的:探討cdh 5-mRNA在野生型斑馬魚胚胎期發(fā)育過程中的表達模式。方法:收取tuebingen野生型斑馬魚多個發(fā)育時間節(jié)點的胚胎,提取其總RNA,體外逆轉(zhuǎn)錄后RT-PCR擴增cdh 5基因片段,將cdh 5基因片段插入pCS^2+質(zhì)粒載體中,挑選陽性單克隆菌落,通過雙酶切、測序等方法鑒定pCS^2+-cdh 5重組質(zhì)粒;重組質(zhì)粒單酶切后用T3RNA體外轉(zhuǎn)錄體系制備地高辛標記的cdh 5基因的反義mRNA探針,對斑馬魚全胚胎進行原位雜交,顯微鏡下觀察各發(fā)育節(jié)點胚胎cdh 5-mRNA雜交信號并拍照。結(jié)果:構(gòu)建并鑒定了pCS^2+-cdh 5重組質(zhì)粒,各發(fā)育節(jié)點胚胎經(jīng)全胚胎原位雜交后發(fā)現(xiàn)在tuebingen野生型斑馬魚胚胎發(fā)育至3.7~12 hpf時cdh 5-mRNA呈低豐度泛在表達,18~36 hpf時在后腦及血管處表達、在造血系統(tǒng)高表達,48 hpf后僅在腦部和血管處低表達。結(jié)論:在野生型斑馬魚胚胎期發(fā)育過程中可以檢測到cdh 5-mRNA在后腦和血管處有表達,并且在造血組織高表達。
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