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豬源IFN-λ3的克隆、表達(dá)及抗病毒活性分析
關(guān)鍵詞：豬肺巨噬細(xì)胞 抗病毒活性
摘要：為了解豬源IFN-λ3的體外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技術(shù)從豬肺巨噬細(xì)胞(CRL2845)中擴增獲得豬源IFN-λ3基因(pIFN-λ3),并將pIFN-λ3基因克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1,構(gòu)建重組質(zhì)粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞。48 h后通過Western blot分析pIFN-λ3瞬時表達(dá)情況,取轉(zhuǎn)染后上清分別作用于PK15、MDCK細(xì)胞進行pIFN-λ3抗病毒活性分析。結(jié)果顯示,本研究成功擴增獲得pIFN-λ3基因,并在293細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá);瞬時表達(dá)能夠抑制表達(dá)綠色熒光蛋白的重組水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus-green fluorescent protein,VSVG)在PK15、MDCK細(xì)胞上的增殖。本研究結(jié)果為深入研究豬源IFN-λ3在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用機理及其應(yīng)用提供參考和依據(jù)。
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