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擬穴青蟹保幼激素酯酶結(jié)合蛋白(JHEBP)基因的克隆與表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：擬穴青蟹 甲基法尼酯 保幼激素酯酶結(jié)合蛋白 保幼激素酯酶 基因表達(dá)
摘要：甲基法尼酯(MF)是甲殼類的保幼激素(JH), MF的代謝可能主要由保幼激素酯酶(JHE)催化完成,保幼激素酯酶結(jié)合蛋白(JHEBP)能緊密結(jié)合JHE,在JHE的代謝中具有重要作用,研究JHEBP對于MF降解通路的探究具有一定促進(jìn)作用。本研究獲得了擬穴青蟹JHEBP基因的cDNA全序列,命名為Sp-JHEBP。Sp-JHEBP序列全長為1647 bp,包含一個891 bp的開放閱讀框(ORF),可編碼296個氨基酸,預(yù)測相對分子質(zhì)量33.79 kD,等電點8.63。利用Target P預(yù)測Sp-JHEBP定位于線粒體, Mitoprot預(yù)測Sp-JHEBP的前31個氨基酸組成的肽段為線粒體定位信號肽。多重序列比對分析發(fā)現(xiàn), Sp-JHEBP的氨基酸序列與多齒新米蝦(Neocaridina denticulata)的一致度最高(67%),其次為黑脈金斑蝶(Danaus plexippus)(43%)。系統(tǒng)發(fā)育樹分析JHEBP與物種分化并不一致,這表明JHEBP隨著物種分化,功能上可能也出現(xiàn)了分化。Sp-JHEBP在所檢測的9個組織中均有表達(dá),在卵巢中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于其它組織,其次是鰓、血淋巴、肝胰腺。在幼體發(fā)育過程中, Sp-JHEBP在受精卵時期最高,從Z1至Z5期逐漸升高,到Z5期達(dá)到最高,隨后逐漸下降到C1期。體外處理MF和法尼酸(FA)顯示Sp-JHEBP受高濃度MF上調(diào),在0.1~5 μmol/L 之間隨著FA濃度升高Sp-JHEBP表達(dá)量升高。綜合分析我們認(rèn)為Sp-JHEBP可能通過降解JHE來參與MF的代謝,該研究結(jié)果對青蟹MF降解分子網(wǎng)絡(luò)的研究具有一定的推動作用。
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