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牛傳染性鼻氣管炎病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重Nano-PCR檢測方法的建立與應(yīng)用
關(guān)鍵詞：牛傳染性鼻氣管炎病毒 牛病毒性腹瀉病毒
摘要：為了對牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)同時進(jìn)行檢測,提高檢測效率,根據(jù)IBRV gE基因序列(GenBank登錄號:L27212.1)和BVDV 5′端非編碼區(qū)序列(GenBank登錄號:AY-278459.1)的保守區(qū)域,分別設(shè)計1對IBRV的特異性引物和1對BVDV的特異性引物,建立用于IBRV和BVDV的雙重納米PCR(Nano-PCR)檢測方法。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞體病毒、牛輪狀病毒和牛冠狀病毒均無交叉反應(yīng),表明該方法的特異性良好。敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法的最低檢測量為10 fg/μL,是普通PCR的10倍,表明該方法的敏感性良好。特異性試驗(yàn)與敏感性試驗(yàn)均進(jìn)行3次重復(fù),結(jié)果一致,重復(fù)性良好。用建立的方法對38份臨床樣品進(jìn)行檢測,IBRV、BVDV及IBRV與BVDV的共感染陽性率分別為5.26%、44.74%和2.63%。綜上所述,建立的Nano-PCR方法可用來對臨床樣品的快速診斷和檢測,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。
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