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鴉膽子素A誘導(dǎo)非小細胞肺癌細胞株H460凋亡及機制的初步研究
關(guān)鍵詞：鴉膽子素 細胞凋亡 癌 非小細胞肺 h460細胞
摘要：目的考察鴉膽子素A(BA)對人非小細胞肺癌細胞系H460細胞凋亡的影響和作用機制。方法用BA對H460細胞進行處理,采用MTT法檢測細胞增殖情況,并利用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測BA對H460細胞凋亡的影響。Hoechst 33342染色和免疫熒光染色觀察細胞凋亡時染色質(zhì)的凝集以及DNA損傷標志蛋白γ-H2AX表達情況。Western blot和RT-PCR檢測H460細胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達水平。結(jié)果MTT結(jié)果表明,與對照組相比,BA能顯著抑制H460細胞增殖。對A549、H1299、H1355三株非小細胞肺癌細胞系進行抑制增殖作用檢測,結(jié)果顯示BA對三株細胞系均有不同程度抑制作用。BA作用48h后,各濃度BA處理H460細胞凋亡率均高于對照組,具有時間依賴性,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。BA處理組可見明顯的染色質(zhì)凝集,細胞核碎片化,DNA損傷標志蛋白γ-H2AX表達明顯增加。Western blot結(jié)果顯示,BA作用48h后,促凋亡蛋白Bax表達升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表達降低,與對照組相比,Bax/Bcl-2比值顯著升高。同時與對照組相比,凋亡通路中的cleaved caspase-9、cleaved caspase-3表達明顯增加,并引起凋亡標志蛋白PARP切割。RT-PCR結(jié)果顯示,BA處理H460細胞后,與對照組相比,Bcl-2基因表達顯著降低。結(jié)論BA能抑制人非小細胞肺癌細胞株H460細胞增殖,顯著誘導(dǎo)其凋亡,該作用與BA引起DNA損傷并激活線粒體凋亡通路有關(guān)。
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