nephrin通過(guò)P13K—Akt途徑抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡
關(guān)鍵詞：足細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 nephrin 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
摘要：目的研究nephrin在血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡中的作用，以及可能的分子機(jī)制。方法體外培養(yǎng)永生化小鼠足細(xì)胞（MPC），以不同濃度AngⅡ處理MPC和10μmol／LAngⅡ刺激不同時(shí)間，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光和Western印跡法檢測(cè)nephrin的表達(dá)和分布；Western印跡法檢測(cè)Akt磷酸化水平。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pcDNA3．1-mNPHS1質(zhì)粒，G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。用Akt抑制劑LY294002或與AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3．1-mNPHSl轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測(cè)Akt磷酸化水平和細(xì)胞凋亡率。結(jié)果（1）AngⅡ以劑量和時(shí)間依賴方式誘導(dǎo)MPC凋亡。AngⅡ受體拮抗藥氯沙坦與AngⅡ共孵育18h，顯著降低AngⅡ單獨(dú)刺激的足細(xì)胞凋亡率（P〈0．05）。（2）10μmol／LAngⅡ刺激12h后，nephrinmRNA和蛋白較對(duì)照組顯著降低，24hnephrinmRNA約為正常對(duì)照的50％（P〈0．05）。正常足細(xì)胞nephrin主要分布于核膜周圍的胞質(zhì)和細(xì)胞膜，隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)，胞膜和胞質(zhì)neDhrin表達(dá)逐漸降低。（5）10μmol／LAngⅡ刺激15min后，Akt磷酸化顯著降低，約為正常對(duì)照細(xì)胞的50％（P〈0．01）。（4）AngⅡ與LY294002共孵育12h后，細(xì)胞凋亡率顯著高于AngⅡ和LY294002單獨(dú)刺激（均P〈0．05）。（5）pcDNA3．1-mNPHSl穩(wěn)定轉(zhuǎn)染顯著上調(diào)足細(xì)胞Akt磷酸化水平（P〈0．05），抑制AngⅡ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡（P〈0．05）。結(jié)論AngⅡ通過(guò)AngⅡ受體誘導(dǎo)小鼠足細(xì)胞凋亡，抑制足細(xì)胞nephrin表達(dá)。nephrin通過(guò)P13K—Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)足細(xì)胞存活狀態(tài)。
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